[實驗] 請問關於HPLC跑鹽類跟清洗的問題- 看板Chemistry

大家好小弟我最近實驗室要接手操作HPLC 用的移動相是磷酸buffer87%+ACN 管柱是C18 但跑出來的peak因為管柱老化開始嚴重拖尾而且與其它peak黏在 ... 批踢踢實業坊 › 看板Chemistry 關於我們 聯絡資訊 返回看板 作者pleomax1080(God)看板Chemistry標題[實驗]請問關於HPLC跑鹽類跟清洗的問題時間FriSep1312:34:352019 大家好 小弟我最近實驗室要接手操作HPLC 用的移動相是磷酸buffer87%+ACN 管柱是C18 但跑出來的peak因為管柱老化開始嚴重拖尾而且與其它peak黏在一起(之前看學長跑的不 會) 主要是想問幾個問題 爬了很多文有的人說鹽類跟ACN絕對不能碰在一起 但又有人說這種跑法很常見 結束後用高水相沖洗就可 所以不曉得到底適不適合這樣做 因為目前的program是跑完15分鐘後 會把ACN調到85% 最後會再調到100%沖提 如果會結晶的話是不是每跑一次就虐待管柱一次 目前舊的管柱已用半年 平衡時壓力據說是剛換時的三倍(900升到2700psi) 我接手後已經搞了一個月 甲醇水ACN各種濃度流速梯度去洗都試過了 最後還是逆洗壓力降到1800 但peak還是分不開 老師一直覺得是我們操作問題不願意換管柱 主要還是想問前輩們如果換了新管柱 要怎麼保護避免他那麼快掛掉 謝謝 -- ※發信站:批踢踢實業坊(ptt.cc),來自:123.195.125.168(臺灣) ※文章網址:https://www.ptt.cc/bbs/Chemistry/M.1568349277.A.D56.html →tony15899:你用buffer跑的過程中ACN的比例過高時鹽類就析出了09/1312:51 →tony15899:HPLC的條件在分析樣品時"洗管柱"並非必要09/1312:52 →tony15899:如果不影響分析只要在分析完樣品再洗就好09/1312:53 →tony15899:你的狀況要洗管柱時還要先用高水相比有機溶劑先洗掉鹽09/1312:54 →tony15899:類才能置換成純有機相再洗09/1312:55 →tony15899:當然那個高水相有機溶劑裡的水是純水不是用Buffer那瓶09/1312:55 →tony15899:還有你的pump裡大概也有鹽類累積，最好用溫純水不接09/1312:57 →tony15899:管柱洗久一點，另外如果有保護管柱的話可以換新的試試09/1312:59 →pleomax1080:先謝謝樓上的大大會調高ACN去沖是因為在我們要的東09/1313:57 →pleomax1080:西(15min)出來之後還會有其它物質(25min)左右雖然09/1313:57 →pleomax1080:我不確定是不是要用高有機才沖的出來我自己沒試過09/1313:57 →pleomax1080:因為上次業務來看我們的program說建議我們把ACN濃09/1313:57 →pleomax1080:度調高然後時間拉長才沖的完全(本來學長只跑ACN85%09/1313:57 →pleomax1080:2分鐘)所以我應該試試看不跑梯度如果後面的peak09/1313:57 →pleomax1080:還是有出來就完全不用把ACN調高一直用87%buffer09/1313:57 →pleomax1080:去跑等結束再用水洗+置換成有機相是這個意思嗎？09/1313:57 →tony15899:https://reurl.cc/4gmnDR參考PDF檔09/1315:46 →tony15899:拉到85%ACN的溶解度都快變0了09/1315:48 →tony15899:如果你的非高ACN條件能把雜質洗出來就延長時間09/1315:54 →tony15899:洗不出來就直接打下一針看會不會影響09/1315:55 →pleomax1080:了解！我再試試看非常感謝09/1317:17 →toko6290:才半年很短耶，我們洗法是高純水和高ACN輪流沖洗，共5009/1322:15 →toko6290:分鐘。

09/1322:15 →pleomax1080:我也跟學長說半年掛掉算快所以才想辦法延長壽命09/1404:32 →pleomax1080:C18是不是不能純水洗呢？09/1404:33 →toko6290:C18是有機相，長期用純水洗或跑會讓它變形，大多會加1009/1411:07 →toko6290:到20%ACN09/1411:07 →toko6290:我前面的高純水是指高濃度純水，不是100%的09/1411:12