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對不起請問一下我在做HPLC時以甲醇在清洗管柱時, UV檢測器的數值會上下據 ... 相由高溶洗的甲醇比例，降為低甲醇比例，似乎不符合逆相層析法，C18,C8. 圖片image 討論區Board 影片Video [ 回應本文] [ 發表新主題] [ 回討論區] [ 回上一頁] afu2010/1/19下午03:31:30 以甲醇在清洗管柱時 對不起請問一下我在做HPLC時以甲醇在清洗管柱時,UV檢測器的數值會上下據烈的跳動由0.9X到-0.9X!!!為何會這樣呢?在先前進行試驗時不會如此,但最近會發生如此怪異現象!?是樣品的問題?是沖提溶劑的問題?是管柱的問題?還是UV檢測器的問題?能否麻煩幫我解答,感激不盡!!謝謝 【我要回應】 【我要回應】 回應者：吳健三 這是第1篇回應文章 您起始移動相為水:甲醇=10/90，60分鐘後改變為水:甲醇=90/10，不論Isocratic或Gradient作法，移動相由高溶洗的甲醇比例，降為低甲醇比例，似乎不符合逆相層析法，C18,C8...操作法則。

請您再確定一次移動相內容比例增變條件，再討論。

【我要回應】 回應者：afu 這是第2篇回應文章 如果我的水:甲醇=10:90,60分鐘後為水:甲醇=90:10,流速為0.8ml/min,而你所說的120ml是應洗多久才可以呢,因為我的管柱已洗了好久了,可是一直洗不乾淨,問題一直存在著,那該怎麼做?繼續洗,還是換支管柱,還是有其他方法??謝謝 【我要回應】 回應者：吳健三 這是第3篇回應文章 您可能採用C18或C8...逆相層析管柱，您沒有提到最後分析的移動相的內容與比例，因此我們猜想:1.假使你最後分析移動相只是甲醇(乙晴)與水調和，(沒有酸、鹽調和)結束分析，用甲醇流洗層析管柱，在檢測出現混亂"吸收值Absorbance"，說明您注入分析，當時的移動相未能將分析物全部溶洗帶出，當時殘存被保持於管柱內。

當高溶洗的甲醇，流洗時，則將之該等殘存持續溶洗出，在檢測器一時出現混亂吸收值。

按一般甲醇流洗約120ml，大致上可將管柱流洗乾淨，而有穩定的吸收值。

2.假使您最後移動相是水相調和酸，或鹽類、分析畢，直接甲醇流洗，非常不好，此時吸光值仍然是混亂值，建議您先用MeOH/H2O=20/80先流洗約120ml，再將甲醇流洗約120ml即可。

基本上，您所擔心的，那些都不是問題。

【我要回應】 回應者：吳健三 這是第4篇回應文章 若您在甲醇/水=90/10之高有機移動相之下，某些分析物仍會殘存層析管柱，建議您分析畢用，甲醇/THF=50/50，流洗約100ml，再以甲醇流洗，約50ml即可。

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