【HPLC小學堂】HPLC Column建議手冊 - 初階水電工

管柱清洗與保存. 當分析物Peak之滯留時間偏移、解析度降低或是背壓過高時，可能是表示column 已受到污染。

a. 有Guard column，每經過一段時間就需 ... 初階水電工 跳到主文 職業專長:抓漏、堵塞、電壓和壓力異常 部落格全站分類：不設分類 相簿 部落格 留言 名片 Jun18Sun201718:09 【HPLC小學堂】HPLCColumn建議手冊 隨著HPLC的普及，分析方法學的開發成為一個合格的分析研究員的標配，而Column的篩選是分析方法開發的第一步，也是最重要的一步，優秀的分析研究員可以根據化合物的結構特徵很快確立所需的Column。

然而，Column的使用或保養不當時，常造成分析者的困擾，所以如何正確使用Column，也是分析源重要課題之一，以下是Column活化以及保存的建議       活化 1.樣品配置 a.建議樣品之配製以移動相(mobilephase)作配置。

b.若樣品無法溶解於移動相中，請確認溶解樣品之溶劑可與移動相互溶以避免樣品沉澱或形成鹽類 c.以0.45um或是0.2um濾膜過濾樣品以除去雜質 2.安裝 a.小心拿取column，不要使column掉落或受到重擊，否則可能會破壞充填物分佈而影響分離效果 b.連結column與1/16”不鏽鋼管(tubing)/peak管時，請連結密合無細縫，以獲得最佳的分析圖譜 c.如果在不鏽鋼螺帽、套環與末端管件間，有滲漏現象，請更換新的螺帽、套環及tubing d.若在末端管件和column之間有滲漏現象，請分別置扳手於管柱本體及末端管件六角形頭鎖緊 e.使用前必先檢查column的流向(其流向箭頭在column上有標示) 3.平衡 a.PurgeHPLCPumpingsystem，直至完全無氣泡後，連接columnInlet至Injectoroutlet，開啟Pump，設定流速為0.1ml/min，當DeltaPressure低於45psi時，緩慢升流速，直到至1.0ml/min。

b.觀察columnoutlet處，當solvent已流動得很順暢，再將columnoutlet與detector連結起來 c.平衡column所需使用的移動相量(flushvolume)，最少需分析管柱體積(columnvolume)之10倍的體積量以上。

(參考下表)以4.6x150mm為例，流速1.0mL/min，至少要25分鐘的平衡時間才足夠 d.當背壓穩定，基線(Baseline)飄移亦不大後，即已平衡，可進行分析 FlushAmountsEqualing10ColumnVolumes ColumnSize ColumnVolume FlushVolume 4.6x150mm 2.5mL 25mL 4.6x250mm 4.2mL 42mL 10x250mm 19.6mL 196mL 20x250mm 78.5mL 785mL 管柱清洗與保存 當分析物Peak之滯留時間偏移、解析度降低或是背壓過高時，可能是表示column已受到污染。

a.有Guardcolumn，每經過一段時間就需更換，因其已受到汙染或阻塞。

當系統的背壓持續高至限度時，這通常代表了guardcolumn需作更換。

或是column前端的濾片作更換，因汙染物在進入column時會被濾片阻隔，附著於濾片之上。

b.若流洗有機溶媒並未解決汙染的問題，可試著用Gradient清洗管柱，舉例來說，變換100%H2O=>50/50H2O/ACN=>100%ACN，以完成整個清洗手續。

c.檢查壓力是否回到正常值，若是清洗成效不彰，可以試著逆洗管柱，使卡在column前端的污染物能被移動相流洗帶走 保存 不要讓buffer、酸性或鹼性流洗液在column內存在太長的的時間。

Column保存前先以10倍columnvolumn之超純水流洗column，洗掉buffer、酸性或鹼性流洗液，再以COA建議的保存溶液流洗column後便可保存。

請將column完全密封起來，以避免column內的保存液揮發而使充填材乾涸。

每支column皆提供密封用栓塞。

注意事項 pHrange 除了一些適用於特殊pH範圍之columns外，一般管柱的pH耐受性在pH2~7之間，建議移動相(包括緩衝溶液)及樣品之pH值需調整在pH2~7之間。

pH<2，會造成鍵結C18之水解，pH>7，時鹼性溶液接觸到silicagel會致使silica溶解，造成column失去分析能力 Temperature 30℃~50℃為column建議使用之溫度。

在此範圍之溫度下可增強選擇性(selectivity)，降低溶劑的黏稠度，增加樣品注射之再現性，及提高樣品成分之質能傳遞(Masstransfer)   Troubleshooting(針對管柱) 系統背壓升高 原因:Column污染 將column以逆洗的方式，流洗10~20倍columnvolume之溶媒，若column前端濾片塞住了，請換新的濾片 Peak解析值降低 原因:Column污染 請以100%有機相溶媒流洗管柱，以除去汙染物。

但流洗過有機相後，請將有機相完全置換回來(以至少20倍columnvolume之溶液流洗管柱，以確保有機溶媒不再存在於管柱中，並達到完全的平衡)。

Peaktailing  原因：請確認column每一聯結的部分是否都有聯接好，確認column與tubing間之nuts、ferrules是否位置、聯結都有鎖緊。

若仍無效，請更換新的column   資料來源:Watersc和YMC       全站熱搜 創作者介紹 初級水電工 初階水電工 初級水電工發表在痞客邦留言(1)人氣() E-mail轉寄 全站分類：不設分類個人分類：【HPLC小學堂】此分類上一篇：【HPLC小學堂】實驗室儀器放假及收心操注意事項-MS質譜儀器篇 此分類下一篇：【HPLC小學堂】UPLC故障排除之H-Class系統壓力過高 上一篇："錢沾"CEO十大排行榜 下一篇：【HPLC應用】你吃的食品天然嗎? ▲top 留言列表 發表留言 站方公告 [公告]2022年度農曆春節期間服務公告[公告]MIB廣告分潤計劃、PIXwallet錢包帳戶條款異動通知[公告]2021年度農曆春節期間服務公告 活動快報 我要抽人氣咖啡機！ 即日起，趕快下載痞客邦App，即可免費獲得眾多好康... 看更多活動好康 我的好友 熱門文章 文章分類 【HPLC應用】(3)【市場訊息】(10)【HPLC小學堂】(19) 最新文章 最新留言 動態訂閱 文章精選 文章精選 2019九月(1) 2018十二月(1) 2018六月(1) 2018四月(1) 2018一月(1) 2017十一月(1) 2017九月(1) 2017七月(1) 2017六月(1) 2017五月(1) 2017四月(6) 2017三月(16) 所有文章列表 文章搜尋 新聞交換(RSS) 誰來我家 參觀人氣 本日人氣： 累積人氣： QRCode POWEREDBY (登入) 回到頁首 回到主文 免費註冊 客服中心 痞客邦首頁 ©2003-2022PIXNET 關閉視窗